固定相的选择对样品的分离起着重要作用，有时甚至是决定性的作用。不同类型的色谱采用不同的固定相，如气-固色谱的固定相为各种具有吸附活性的固体吸附剂；气-液色谱的固定相是载体表面涂渍的固定液，液相色谱中的固定相为各种键合型的硅胶小球，离子交换色谱中的固定相为各种离子交换剂，排阻色谱中的固定相为各种不同类型的凝胶等等。
基质及其性质
硅胶
硅胶是HPLC填料中最普通的基质。硅胶除了具有良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面积、较好的化学稳定性和热稳定性以及专一的表面化学反应等优点外，还有一个突出的优点就是其表面含有丰富的硅羟基。
氧化铝
具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的PH范围。它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀，但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定
