紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關系圖即得被測物質的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin。物質的吸收光譜具有與其結構相關的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內樣品的光譜與對照光譜或對照品光譜的比較，或通過確定最大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質。用于定量時，在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數法求算出樣品溶液的濃度。 簡介 光譜法（spectrometry）是基于物質與電磁輻射作用時，測量由物質內部發生量子化的能級之間的躍遷而產生的發射、吸收或散射輻射的波長和強度進行分析的方法。光譜法可分為發射光譜法、吸收光譜法、散射光譜法；或分為原子光譜法和分子光譜法；或分為能級譜，電子、振動、轉動光譜，電子自旋及核自旋譜等。 分光光度法是光譜法的重要組成部分，是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。常用的技術包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法等。 紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用于鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。 應用 1.檢定物質 根據吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ max和摩爾吸收系數ε，是檢定物質的常用物理參數。 2.與標準物及標準圖譜對照 將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。 3.比較最大吸收波長吸收系數的一致性 由于紫外吸收光譜只含有2～3個較寬的吸收帶，而紫外光譜主要是分子內的發色團在紫外區產生的吸收，與分子和其它部分關系不大。具有相同發色團的不同分子結構，在較大分子中不影響發色團的紫外吸收光譜，不同的分子結構有可能有相同的紫外吸收光譜，但它們的吸收系數是有差別的。如果分析樣品和標準樣品的吸收波長相同，吸收系數也相同，則可認為分析樣品與標準樣品為同一物質。 4.反應動力學研究 借助于分光光度法可以得出一些化學反應速度常數，并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數據，得出反應活化能。 5.純度檢驗 紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質。如果化合物的紫外可見光區沒有明顯的吸收峰，而它的雜質在紫外區內有較強的吸收峰，就可以檢測出化合物中的雜質。 6.氫鍵強度的測定 不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。 7.絡合物組成及穩定常數的測定[1] 影響 折疊溶液濃度的影響 當溶液濃度較大時，吸光質點間可能發生締合等相互作用，直接影響了它對光的吸收。因此，朗伯-比耳定律只適用于稀溶液3. 折疊化學反應的影響 溶液中存在著解離、締合、互變異構、配合物的形成等化學平衡，化學平衡與濃度、pH等其他條件密切相關。不同條件可導致吸光質點濃度變化,吸光性質發生變化而偏離朗伯-比耳定律 消除方法為控制反應條件。例如，在鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡:2Cr02+2H+ Cr02+ HO。Cr02、Cr02的顏色不同，吸光性質也不同。用光度法測定CrO.2或Cr,0-2含量時，溶液濃度及酸度的改變都會導致平衡移動而發生對朗伯-比耳定律的偏離，為此應加入強堿或強酸作緩沖溶液以控制酸度。 折疊非平行光和光散射的影響 當入射光是非平行光時，所有光通過介質的光的光程不同，引起小的偏離。另外，當溶液中含有懸浮物或膠粒等散射質點時，入射光通過溶液時就會有一部分光因散射而損失掉，使透過光強度減小，測得的吸光度增大，從而引起偏離吸收定律
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